【摘要】目的建立接骨膠囊中阿魏酸的含量測定方法。方法采用反相高效液相色譜法,色譜柱：HypersilC18(4.6mm×250mm,5μm),流動相為甲醇-1%冰乙酸(33∶67),檢測波長為320nm,流速為1.0mL/min。結果阿魏酸在0.12～1.2μg范圍內呈良好的線性關系(r＝0.9999),平均回收率為99.6%,RSD＝1.8%。結論該方法簡便、準確,可用于控制接骨膠囊制劑的質量。
【關鍵詞】接骨膠囊；阿魏酸；高效液相色譜法；含量測定
Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofFerulicacidinJieguCapsule.MethodThesamplesweredeterminedbyRP-HPLConaHypersilC18column(4.6mm×250mm,5μm).Themobilephaseconsistedofmethanoland1%aceticacid(33∶67).Thedetectionwavelengthwasat320nmandtheflowratewas1.0mL/min.ResultsThecalibrationcurvesofFerulicacidwaslinearintherangeof6～60μg/mL(r＝0.9999).Theaveragerecoverywas99.6%andRSDwas1.8%.ConclusionThemethodissimpleandaccurate,whichcanbeusedforthequalitycontrolofJieguCapsule.
Keywords：JieguCapsule；Ferulicacid；HPLC；contentdetermination
接骨膠囊是在接骨片[《衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑》(第2冊)WS3-B-0402-90]的基礎上研制的新制劑,由四號銅粉、川芎、制川烏、當歸、乳香(醋炙)、沒藥(醋炙)、自然銅(煅)7味中藥組成,具有散瘀、活血、止痛的功效,臨床用于跌打損傷、筋傷骨折、瘀血腫痛。阿魏酸為本品有效成分之一,且含量較高。本試驗采用高效液相色譜法對接骨膠囊中的阿魏酸進行了含量測定,為控制本品的質量提供依據。
1、儀器與試藥
日本島津高效液相色譜儀LC-6A系列；LC-6A溶劑輸送泵；SPD-6AV紫外-可見分光檢測器；NASTA色譜工作站；7125型定量進樣閥。接骨膠囊(自制,規(guī)格：0.2g/粒,批號070810、070812、070814)；阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號110773-9910)。甲醇為色譜純,醋酸為分析純,水為重蒸水。
2、方法與結果
2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗
HypersilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動相：甲醇-1%冰乙酸(33∶67,v/v)；檢測波長：320nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min。在此條件下,阿魏酸與其他組份分離度大于1.5,按阿魏酸峰計算理論塔板數不低于2000,色譜峰的對稱因子為0.95～1.05。
2.2溶液制備
2.2.1對照品溶液的制備
取阿魏酸對照品適量,精密稱定,用甲醇配成每1mL含0.06mg的溶液。
2.2.2供試品溶液的制備
取接骨膠囊50粒,取研細內容物約2.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇-水(50∶50,v/v)25mL,密塞,稱定重量,超聲處理(功率200W,頻率40kHz)30min,放冷,再稱定重量,用甲醇-水(50∶50,v/v)補足減失的重量,混勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.2.3陰性對照溶液的制備
按照處方比例和制備工藝,制備不含川芎和當歸的陰性模擬制劑,照“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。
2.3分析方法驗證
2.3.1專屬性考察
取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液,在上述色譜條件下進樣20μL,記錄色譜圖,結果見圖1。由色譜圖知,阿魏酸峰保留時間約15.6min,陰性對照樣品溶液在阿魏酸峰位置無干擾峰,阿魏酸與其他組份可完全分離。
2.3.2標準曲線制備
精密吸取阿魏酸對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、10.0mL,分別置10mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀釋至刻度,搖勻,各進樣20μL,按上述色譜條件進行測定。以阿魏酸濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,計算得回歸方程：Y＝82824X－560.95,r＝0.9999,表明阿魏酸在0.12～1.2μg范圍內線性關系良好。
2.3.3精密度試驗
精密吸取阿魏酸對照品溶液2.0mL,置10mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀釋至刻度,搖勻,進樣20μL,重復進樣5次,按上述色譜條件進行測定,結果阿魏酸峰面積RSD＝1.1%。
2.3.4重復性試驗
取同一批樣品(批號070810)約2g,精密稱定,共5份,按“2.2.2”項下方法操作,測定結果的RSD＝1.7%。
2.3.5穩(wěn)定性試驗
取同一供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、24h,精密吸取20μL,注入液相色譜儀,測定阿魏酸峰面積,RSD＝1.6%,說明供試品溶液在24h內基本穩(wěn)定。
2.3.6加樣回收率試驗
取已知含量的樣品(批號070810)約1g,精密稱定,共9份,分別加入1.5、3.0、4.5mL阿魏酸對照品溶液,按“2.2.2”項下方法操作,按上述色譜條件測定,結果見表1。表1接骨膠囊中阿魏酸的加樣回收率試驗結果(略)
2.4樣品測定
精密吸取供試品溶液20μL,按上述色譜條件測定,3批樣品測定結果見表2。表23批樣品的阿魏酸含量測定結果(略)
3、討論
樣品提取方法及條件考察[1-2]分別采用甲醇-水(50∶50,v/v)、甲醇、流動相為溶劑,分別超聲提取15、30、60min,比較阿魏酸的含量,結果表明,樣品用甲醇-水(50∶50,v/v)超聲提取30min較為適宜。另外,本試驗曾用甲醇-水(50∶50,v/v)加熱回流,結果阿魏酸含量與超聲提取30min比較沒有明顯提高,但因加熱回流操作繁瑣,故采用超聲提取為樣品提取方法。
本試驗采用高效液相色譜法測定接骨膠囊中阿魏酸的含量,方法簡便,結果可靠,可作為該制劑的質量控制方法。
全部產品